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基本方案1:碱裂解法制备粗制裂解物
01 实验材料
- 含有氨苄青霉素或其他适当的选择性试剂的LB培养基或丰富培养基(如超级肉汤或TB超级肉汤培养基)
- 带有质粒的大肠杆菌菌株
- 葡萄糖/Tris/EDTA (GTE)溶液卵清溶菌酶
- NaOH/SDS 溶液
- 3 mol/L乙酸钾溶液 , pH 约5.5
- 异丙醇
- 70%乙醇
- 约20 ml容量的高速离心管
1)往5 ml的含选择性试剂(通常是氨苄青霉素)的LB培养基或丰富培养基接种单菌落,于37℃剧烈振荡培养过夜 。
2)往2L烧瓶中加入 500 ml含有适当抗生素的LB培养基,然后加人1 ml过夜培养的大肠杆菌培养物,再于37℃培养至饱和状态(OD600≈4),于4℃,6000
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